什麼是分子選殖 (Molecular Cloning)？

分子選殖 (Molecular Cloning) 是分子生物學中極為核心的技術，其主要目的是將特定的目標 DNA 片段 (例如：整個基因、啟動子或非編碼序列) 分離出來，並插入至載體 (Vector) 中，隨後導入宿主細胞 (如 E. coli) 進行大量複製與擴增。

這項技術的應用意義非常廣泛，涵蓋了基礎生物學研究與實際應用層面。透過分子選殖，科學家能夠：

• 進行大規模的蛋白質生產：例如生產胰島素或其他重組蛋白藥物。

• 基因功能分析與疾病研究：精確定位並鑑定出與特定表型或疾病相關的基因序列。

• 基因指紋分析與基因工程：用於各式分子生物學實驗與生物技術開發。

一個標準的 DNA 選殖實驗通常包含四個主要步驟：片段化（DNA 擴增與純化）、連接（Ligation）、轉化（Transformation）以及篩選與確認（Screening/Selection）。為了幫助您的實驗順利進行，我們在各個關鍵環節為您提供高品質的試劑與耗材。

1. 目標基因擴增與純化 (DNA Amplification & Purification)

在進行選殖前，首先需要透過聚合酶連鎖反應（PCR）擴增出目標 DNA 片段，並將片段進行純化以利後續的載體建構。

• PCR 聚合酶 (Polymerase)： 我們提供高保真度的 DNA 聚合酶，確保基因擴增的正確性。

  • SMOB-TF1000 SMO-HiFi™ DNA Polymerase (1 U/μl, 100 U)

  • SMOB-TF3000 G-HiFi™ DNA Polymerase (1 U/μl, 100 U)

• 純化回收套組 (Clean Up Kit)： 用於 PCR 產物純化或自瓊脂糖凝膠中萃取 DNA。

  • OKB-A-04-001 OK PCR Clean Up/Gel Extraction Kit (100 rxn)

2. 轉化作用 (Transformation)

將建構好的質體（Vector + Insert）導入宿主細胞（如大腸桿菌）中，使其在細胞內進行增殖。這一步需要使用高效率的勝任細胞（Competent cell）。

• 勝任細胞 (Competent cell)：

  • CC0202 Champion™ 109 High, 80 tubes

  • CC5202 Champion™ DH5α High, 80 tubes

  • CC2102 Champion™ 21, 80 tubes

3. 菌落篩選與基因確認 (Screening & Electrophoresis)

由於轉化效率並非百分之百，且需確認目標 DNA 片段是否以正確的方向插入載體中，因此需要透過藍白篩（X-gal medium）、抗生素篩選以及 Colony PCR (菌落 PCR) 等方法來挑選並驗證成功的菌株。

• Colony PCR 預混液 (Master Mix)：

  • TP1120 ExcelTaq™ 2X PCR Master Mix (MgSO4), 100 RXN

  • TP1200 ExcelTaq™ 5X PCR Master Dye Mix, 200 RXN

• 電泳分析試劑 (Electrophoresis)： 用於確認 PCR 產物或限制酶切割後的 DNA 片段大小是否正確。

  • DNA 標記 (DNA Ladder)：

    • DM2100 ExcelBand™ 100 bp DNA Ladder (500 μl)

    • DM2300 ExcelBand™ 100 bp+3K DNA Ladder (500 μl)

    • DM3100 ExcelBand™ 1KB (0.25-10 kb) DNA Ladder (500 μl)

    • DM3200 ExcelBand™ 1KB Plus (0.1-10 kb) DNA Ladder (500 μl)

  • 電泳染劑與加樣染劑 (Dyes)：

    • DL3000 ExcelDye™ 6X DNA Loading Dye, Blue (5 ml x 2)

    • DL4000 ExcelDye™ 6X DNA Loading Dye, Tri-color (5 ml x 2)

    • DL5000 FluoroDye™ DNA Fluorescent Loading Dye (Green, 6X, 1 ml)

    • DS1000 FluoroStain™ DNA Fluorescent Staining Dye (Green, 10,000X, 500 μl)

    • NS1000 FluoroVue™ Nucleic Acid Gel Stain (10,000X, 500 μl)

4. 質體抽取 (Plasmid Extraction)

確認篩選出含有正確建構體的菌株後，需要將細菌大量培養並將擴增後的質體 DNA 萃取出來，用於後續的定序確認或轉染實驗。

• 抽質體套組 (Miniprep Kit)：

  • OKB-I-01-001 OK Plasmid Miniprep Kit (100 rxn)